用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/29 02:58:54
用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计
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用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计
用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列
我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计引物做TAIL-PCR,产物都在1000bp以上,侧序后刨除那300-500bp 后,剩下的碱基就应该是整合在基因组上的序列才对啊,可是还是载体上的序列(比如扩增3‘,载体上的序列指的是5’的碱基),难道是酶切失败,还是说酶切后又自连,整个环状质粒载进去了.那如果是环状的质粒还能整合到基因组中吗?还能表达吗?
大家有没有遇到过这种情况啊?现在是一点头绪也没有啦!

用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计
我说说我的理解,仅供参考:
你本来的意图,是通过载体线性化后,外源基因与基因组同源位点的双交换,将其整合入基因组中,对吗?
如果说是整个环状质粒导入基因组,从理论上来说是有可能的,单酶切就可以了,而且概率比双酶切还要高,虽然我们一般都用线性材料转基因.
如果想验证一下是不是质粒整合进入的,我觉得既然TAIL-PCR就是做染色体步查的,如果你有时间,再往前走一段看看.
不过如果是环状整合的话,基因组有很大一段插入,从理论上是不能表达了.

这个是得问 专业人士

用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计 Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了 Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了,特异引物也重新设计了,还是不行, 菌落PCR技术鉴定阳性重组菌落PCR扩增的序列是环状的质粒,还是线性的质粒呢?那载体通用引物是什么呢?用它扩增的是哪段序列呢? 转基因植物PCR检测,扩增条带比预期目的条带要大,对PCR扩增产物测序,结果与原序列比对同源性为60%,说明转基因植物PCR检测,扩增条带比预期目的条带大得多,对pCR扩增产物测序,返回结果为重复 引物是否只是PCR扩增中的目标链,它与扩增产生的DNA链序列有什么区别? 如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物 一段DNA序列为:acgttgatgcaggtg.cgtgcagaacaggct,可用于PCR扩增的引物对是: PCR扩增的产物中是不是也含有引物设计中的序列啊 如果要用PCR扩增下列IL-8序列,请写出上游引物和下游引物的序列(分别20nt长)如果要用PCR扩增下列IL-8序列,请写出上游引物和下游引物的序列(分别20nt长) 1 atggctgctg aaccagtaga agacaattgc atcaactttg 我是想扩增其侧翼序列,但是它整个序列AT含量很高,不知道怎么设计引物呢 用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr,在设计引物时,设计引物所用的序列有区别么 什么是侧翼序列 什么是侧翼序列 侧翼序列包括什么 关于PCR扩增技术的 PCR 所扩增出的DNA序列是不是只是模板DNA序列中的一部分?只有符合要求的DNA模板序列可以制作相应的引物,而只能在引物之后继续延伸,有些序列不就扩增不出来了吗?PCR扩增一般只是扩增上下 关于pfu酶扩增PCR产物在做PCR时,用pfu聚合酶扩增出来的产物都是平末端的吗?就是说不管引物序列5'端加的的酶切位点是平末端的还是粘性末端的,只要是用pfu聚合酶扩增出来,那么产物都是平末