作业帮博凌科为的SYBR Green I荧光染料( 荧光定量PCR级)在使用时有哪些需要注意的?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/01 02:37:54
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博凌科为的SYBR Green I荧光染料( 荧光定量PCR级)在使用时有哪些需要注意的?
博凌科为的SYBR Green I荧光染料( 荧光定量PCR级)在使用时有哪些需要注意的?
博凌科为的SYBR Green I荧光染料( 荧光定量PCR级)在使用时有哪些需要注意的?
博凌科为的SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800～1000倍.在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,它特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步.荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定.
注意事项：
1．使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素.如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低,这就意味着低拷贝的样品可能无法检出.而在高浓度时,将会抑制PCR反应,降低PCR反应效率.所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为0.2×到1×之间.
2．镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用.我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时,镁离子浓度比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应高出0.3mM.
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