作业帮大肠杆菌cacl2处理
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/30 19:26:14
大肠杆菌cacl2处理
大肠杆菌cacl2处理
大肠杆菌cacl2处理
你是要问处理的目的还是要做感受态细胞的过程啊
下面是做感受态细胞的过程：
1.从37℃培养16~20 h 的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52）,或1 ml 新鲜的16~20 h过夜培养物,转到一个含有100ml LB培养基的1 L 或500 ml 培养瓶中.于37℃振摇培养约2~3 h（旋转摇床200~300 r/min）,每隔20~30 min测量OD600值≈0.4.
2.在无菌条件下将细菌转移到一个,用冰预冷的50 ml 聚丙烯离心管中,冰上放置10~20 min.
3.于4℃4000转 /分离心10 min,回收细菌细胞.
4.将管倒置1 min,以使最后残留的痕量培养液流尽.
5.以10 ml 用冰预冷的0.1 mM CaCl2重悬每份沉淀,放于冰上 ,4℃4000转 /分离心10 min,回收细菌细胞.
6.每50 ml 初始培养物用2 ml 冰预冷的0.1 M CaCl2重悬每份沉定,此时,可以迅速将细胞分装成小份,液氮中冰冻,-70℃贮存备用.
7.用无菌吸头从感受态细胞悬液中取200 μl 转移到无菌的微量离心管中,加DNA或连接反应混合物（体积≤10 μl,DNA≤50 ng）,轻旋以混匀内容物,冰浴30 min.
8.将离心管放到预加温到42℃的水浴中,90 s.
9.将混合物快速转移到冰浴中,冷却1~2分钟,加入适当的培养基在37 ℃培养45 分钟,使细胞复苏,并表达质粒所携带的转化基因.
10.将适当体积（每个90 mm平板可达200 μl）已转化的感受态细胞转移到相应抗生素的平板培养基上.
11.将平板置于室温至液体被吸收 ,倒置平板于37℃培养箱中,12~16 h,平板培养,克隆在此期间应该出现,否则转化不成功.