为什么目的基因不能直接插入载体?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/28 22:04:11
为什么目的基因不能直接插入载体?
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为什么目的基因不能直接插入载体?
为什么目的基因不能直接插入载体?

为什么目的基因不能直接插入载体?
不行,
是这样的:
基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒(plasmid),即独立于细菌拟核处染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子.是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢?其实不然,作为基因工程使用的载体必需满足以下条件.
(1) 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点,以便目的基因可以插入到载体上去.这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置,还必须是在质粒本身需要的基因片段之外,这样才不至于因目的基因的插入而失活.
(2) 载体DNA必需具备自我复制的能力,或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制.
(3) 载体DNA必需带有标记基因,以便重组后进行重组子的筛选.
(4) 载体DNA必需是安全的,不会对受体细胞有害,或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去.
(5) 载体DNA分子大小应适合,以便提取和在体外进行操作,太大就不便操作.
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件,都要进行人工改造后才能用于基因工程操作.

要先用限制内切酶处理目的基因和载体,使它们露出相同的粘性末端(基本上都是粘性末端,平末端较少),这样才能使目的基因和载体两者的末端很好的拼合在一起。否则接不上。

插?怎么插?
运载体多为质粒,是很稳定且牢固的环状DNA。
DNA分子就像梯子,梯子的扶手由磷酸二酯键构成,非常牢固,要限制性内切酶才能切开。
切开后质粒会出现两个粘性末端,所以必须用相同的内切酶切下目的基因,这样目的基因和
粘性末端才能接合。...

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插?怎么插?
运载体多为质粒,是很稳定且牢固的环状DNA。
DNA分子就像梯子,梯子的扶手由磷酸二酯键构成,非常牢固,要限制性内切酶才能切开。
切开后质粒会出现两个粘性末端,所以必须用相同的内切酶切下目的基因,这样目的基因和
粘性末端才能接合。

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为什么目的基因不能直接插入载体? 是不是插入目的基因的载体全都有标记基因? 为什么载体上的抗性基因不能促进目的基因的表达 为什么不直接把目的基因导入受体细胞,而要用载体 拟核中的DNA分子为什么不能用作目的基因载体 目的基因与载体的体外连接.为什么目的基因要比载体多些? 可否直接从目的基因的RNAi载体上提取目的基因,求方法 关于基因表达载体基因表达载体,不是用限制酶切开质粒,然后插入目的基因吗?那么,为什么又要有启动子来启动转录出mRNA?要RNA来干什么? 克隆载体在生物体内的表达蛋白的量小,为什么有的实验,还将含有目的基因的克隆载体,直接打入生物体内 重组DNA技术包括切割目的基因片断,切割载体DNA将____插入____DNA中? 基因工程中如何避免载体的自我环化和目的基因的双向插入? 构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和已经预先双酶切的目的载体连接,那么?先前的目的基因为什么不直接和目的载体相连呢?为什 基因文库中获取目的基因能直接用于载体的构建 目的基因先克隆入克隆载体再亚克隆入表达载体与直接将目的基因克隆到表达载体上有什么好处? 为什么合成胰岛素时,不能直接把人的胰岛素基因直接转入大肠杆菌内,而是需要插入cDNA呢? 构建基因表达载体时如何保证目的基因插入位置在启动子与终止子之间 为什么pcr扩增得到的目的基因不能直接用于连接反应 转基因技术:为什么不能直接将目的基因注入细菌体内