作业帮PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教,
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 12:43:11
PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教,
PCR产物测序问题
用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教,
PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教,
你让公司测通 不然最多只能测1000左右的序列 而且只有不到800的测序是靠谱的 后面的都不靠谱
你先要电泳，跟Marker比，看看分子量是多少，再用软件进行序列匹配，确定引物有很强的特异性，这才能断定你P出来的是你要的目标产物，按你所说，这个很有可能不是目标产物菌液PCR条带和提质粒酶切都是正确的，所以才去测序，不知道为什么只测出1000bp，前面20bp左右序列不太一样，后面都是一样的测序说明： 测序时，由于荧光染料的干扰，测序结果在引物3'端后面的10至30个，严重时可能达到70个以上...
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你先要电泳，跟Marker比，看看分子量是多少，再用软件进行序列匹配，确定引物有很强的特异性，这才能断定你P出来的是你要的目标产物，按你所说，这个很有可能不是目标产物
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你测了几个反应？
一般测序一个反应现在能测到800bp以上，你如果只测一个反应，出来1000bp正常，因为再长就测不出来了
如果你已经双向测序了，由于测序时候引物后面较近的几十个碱基效果不好，一般测序报告中不会包括的，所以1200bp的双向测序测出1000多bp也正常，缺少的应该是引物后面的序列是测了一个反应，测的双向的，我的目的片段是已知的一段序列，1200左右，测序就是为了验证...
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你测了几个反应？
一般测序一个反应现在能测到800bp以上，你如果只测一个反应，出来1000bp正常，因为再长就测不出来了
如果你已经双向测序了，由于测序时候引物后面较近的几十个碱基效果不好，一般测序报告中不会包括的，所以1200bp的双向测序测出1000多bp也正常，缺少的应该是引物后面的序列
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最好选择T载体连接转化后，拿菌液去测，但是1200bp要选择测通。PCR产物测序，准确度比较低。